JLM-Lifetech"s PCR "Twin Stars" помогает CAHS в разработке нового метода обнаружения "5-в-1 мультиплекс" для овец и коз
На поле битвы за профилактику и борьбу с болезнями животных время – это жизнь, а точность – это победа. Вирус голубого языка (BTV), вирус ящура (FMDV), вирус Шмалленберга (SBV), вирус вредителей мелких жвачных животных (PPRV) и вирус оспы овец/коз (SPPV-GTPV) представляют собой пять основных вирусных заболеваний, которые серьезно угрожают отрасли разведения овец и коз. При наличии схожих клинических проявлений (таких как высокая температура, поражение слизистых оболочек и кожная сыпь) и склонности к смешанным инфекциям их выявление с помощью тестирования на один возбудитель требует много времени и средств. Такие традиционные методы уже не могут удовлетворить насущные потребности таможенного карантина и масштабного эпидемиологического скрининга.
Недавно исследовательская группа под руководством Ши Сиджу из Китайской академии наук о домашних животных (CAHS)/Китайской академии таможенных наук и технологий опубликовала крупный исследовательский прорыв в областиКитайский журнал ветеринарной науки. Они успешно разработали метод мультиплексной флуоресцентной RT-PCR в реальном времени, способный одновременно обнаруживать эти пять важнейших вирусов мелких жвачных животных. В этом исследовании цифровая система ПЦР Digital Matrix-5000 компании JLM-Lifetech и система количественной флуоресцентной ПЦР QX600 объединили свои силы в «золотой дуэт», взяв на себя ключевые обязанности по «калибровке» и «обнаружению» соответственно.
В этом исследовании исследователи впервые создали рекомбинантные плазмиды, содержащие целевые гены пяти вирусов. Чтобы определить точное количество копий, содержащихся в этих «стандартных справочных материалах», исследовательская группа выбрала цифровую систему ПЦР Digital Matrix-5000 компании JLM-Lifetech для точного количественного определения.
Как показано на рисунках ниже, абсолютную количественную оценку проводили для положительных плазмид BTV, ящура, SBV, PPRV и SPPV-GTPV. Графики капель для каждой целевой плазмиды продемонстрировали отличное разделение между положительными и отрицательными каплями. Концентрация каждого стандартного эталонного материала варьировалась от 2,13 х 10.3до 1,02 х 104копий/мкл, обеспечивая надежную базовую концентрацию для последующего построения стандартной кривой и анализа чувствительности.
Используя точную «линейку», предоставленную цифровой ПЦР JLM-Lifetech, исследовательская группа затем использовала систему количественной флуоресцентной ПЦР JLM-Lifetech QX600 для создания мультиплексного анализа обнаружения. Им успешно удалось синхронизировать обнаружение всех пяти вирусных мишеней в рамках единой реакционной системы:
Многоканальный одновременный сбор:В ходе реакции QX600 успешно собирал сигналы флуоресценции по нескольким каналам, включая FAM, HEX, ROX, TAMRA, CY5 и CY5.5, гарантируя, что сигналы различных вирусов не подвержены взаимным помехам и могут быть точно идентифицированы.
Выдающаяся системная совместимость:По сравнению с одиночными анализами эффективность амплификации (значение E) мультиплексной системы оставалась в идеальном диапазоне 90–100%, а коэффициенты корреляции (R2) все были больше 0,996. Это демонстрирует высокую стабильность прибора и низкую частоту ошибок при мультиплексном обнаружении.
Сочетание «цифровой ПЦР-калибровки + обнаружения QX600» от JLM-Lifetech обеспечило исключительную производительность этого прорывного исследования:
100% Специфичность:Установленный метод генерировал сигналы амплификации только для целевых вирусов, оставаясь отрицательными для семи других распространенных патогенов, поражающих овец и коз.
Сверхвысокая чувствительность:Предел обнаружения (LoD) для каждой мишени был ниже 5,31 копий/мкл. Даже если вирусная нагрузка в образце чрезвычайно низка, этот метод позволяет точно ее уловить.
Наилучший результат в клинической валидации:При тестировании 500 клинических образцов метод успешно выявил положительные образцы на вирус ЧМЖ, вирус ящура и вирус BTV, достигнув 100% соответствия результатам метода одиночной кПЦР.
Это исследовательское достижение не только нашло свое место в основном журнале.Китайский журнал ветеринарной наукино и имеет глубокое практическое значение. Он объединяет пять отдельных экспериментов в один, что значительно снижает потребление реагентов и расходных материалов, а также затраты на рабочую силу. Это особенно подходит для крупномасштабного досмотра в регионах с интенсивным сельским хозяйством, таких как Северо-Западный Китай, и обеспечивает мощный «умный глаз» для быстрого таможенного карантина в портах. Компания JLM-Lifetech, оказавшая техническую поддержку этому исследованию, имеет огромную честь.
