JLM-ライフテックのPCR「ツインスター」がCAHSの羊とヤギの新しい「5-in-1マルチプレックス」検出方法の確立を支援

動物の病気の予防と管理の戦場では、時間が命であり、正確さが勝利です。ブルータングウイルス (BTV)、口蹄疫ウイルス (FMDV)、シュマレンベルグウイルス (SBV)、ペスト・デ・プチ・反芻動物ウイルス (PPRV)、および羊痘/ヤギ痘ウイルス (SPPV-GTPV) は、ヒツジとヤギの飼育産業を深刻な脅威にさらす 5 つの主要なウイルス性疾患です。同様の臨床症状（高熱、粘膜病変、皮膚発疹など）を共有し、混合感染を起こしやすいため、単一病原体検査でそれらを検出するには時間と費用がかかります。このような従来の方法では、もはや税関検疫や大規模な疫学スクリーニングといった緊急のニーズを満たすことはできません。

最近、中国家庭動物科学院（CAHS）/中国税関科学技術院のShi Xiju氏率いる研究チームは、中国獣医学ジャーナル。彼らは、これら 5 つの重要な小型反芻動物ウイルスを同時に検出できる多重リアルタイム蛍光 RT-PCR 法の確立に成功しました。この研究では、JLM-Lifetech の Digital Matrix-5000 デジタル PCR システムと QX600 定量蛍光 PCR システムが「ゴールデン デュオ」として連携し、それぞれ「校正」と「検出」という重要な役割を担っています。

この研究では、研究者らはまず、5種類のウイルスの標的遺伝子を含む組換えプラスミドを構築した。これらの「標準参照物質」に含まれる正確なコピー数を決定するために、研究チームは、正確な定量化のために JLM-Lifetech の Digital Matrix-5000 デジタル PCR システムを選択しました。

以下の図に示すように、BTV、FMDV、SBV、PPRV、および SPPV-GTPV の陽性プラスミドに対して絶対定量を実行しました。各標的プラスミドの液滴プロットは、陽性液滴と陰性液滴間の優れた分離を示しました。各標準物質の濃度は 2.13 x 10 の範囲でした。³～1.02×10⁴コピー/μL は、その後の標準曲線の作成と感度分析のための固体濃度のベースラインを提供します。

JLM-Lifetech のデジタル PCR によって提供される正確な「定規」を使用して、研究チームは JLM-Lifetech QX600 定量的蛍光 PCR システムを利用して多重検出アッセイを確立しました。彼らは、単一の反応システム内で 5 つのウイルス標的すべての同期検出に成功しました。

マルチチャンネル同時取得:反応中、QX600 は、FAM、HEX、ROX、TAMRA、CY5、CY5.5 を含む複数のチャネルにわたる蛍光シグナルの収集に成功し、さまざまなウイルスのシグナルが相互干渉せず、正確に識別できることを確認しました。

優れたシステム互換性:シングルプレックスアッセイと比較して、マルチプレックスシステムの増幅効率 (E 値) は 90% ～ 100% の理想的な範囲内に留まり、相関係数 (R²) はすべて 0.996 を超えていました。これは、多重検出における機器の高い安定性と低いエラー率を示しています。

JLM-Lifetech の「デジタル PCR キャリブレーション + QX600 検出」の組み合わせにより、この研究の画期的な成果に卓越したパフォーマンスがもたらされました。

100% の特異性:確立された方法では、標的ウイルスに対してのみ増幅シグナルが生成され、ヒツジやヤギに影響を与える他の 7 つの一般的な病原体に対しては陰性のままでした。

超高感度:各ターゲットの検出限界 (LoD) は 5.31 コピー/μL 未満でした。サンプル中のウイルス量が非常に少ない場合でも、この方法では高感度にウイルス量を捕捉できます。

臨床検証における完璧なスコア:500 の臨床サンプルの検査において、このメソッドは PPRV、FMDV、および BTV の陽性サンプルを検出することに成功し、シングルプレックス qPCR メソッドの結果と 100% の一致を達成しました。

この研究成果は、主要なジャーナルに掲載されただけではありません。中国獣医学ジャーナルしかし、同時に深い実用的な意味も持っています。 5 回の別々の実験が 1 回の実行に凝縮され、試薬や消耗品の消費量、人件費が大幅に削減されます。これは、中国北西部のような集約農業地域における大規模な検査に特に適しており、港での迅速な税関検疫のための強力な「スマートアイ」を提供します。 JLM-Lifetech は、こ​​の研究の技術支援者として、大変光栄に思っております。