Le "Twin Stars" PCR di JLM-Lifetech aiutano CAHS a stabilire un nuovo metodo di rilevamento "multiplex 5 in 1" per ovini e caprini
Nel campo di battaglia della prevenzione e del controllo delle malattie animali, il tempo è vita e la precisione è vittoria.virus del parassita dei piccoli ruminanti (PPRV), e virus della varicella ovina/varicella caprina (SPPV-GTPV) sono cinque principali malattie virali che minacciano gravemente l'industria ovino-caprina.lesioni della mucosa, e eruzioni cutanee) e essendo inclini a infezioni miste, rilevarli mediante test per un singolo agente patogeno richiede tempo e costi.Tali metodi tradizionali non possono più soddisfare le esigenze urgenti di quarantena doganale e di screening epidemiologico su larga scala.
Recentemente, il team di ricerca guidato da Shi Xiju presso la China Academy of Household Animal Science (CAHS) / Chinese Academy of Customs Science and Technology ha pubblicato una grande scoperta di ricerca nel settore della protezione degli animali domestici.Giornale cinese di scienza veterinariaHanno stabilito con successo un metodo RT-PCR a fluorescenza in tempo reale multiplex in grado di rilevare contemporaneamente questi cinque virus cruciali dei piccoli ruminanti.Il sistema di PCR digitale Digital Matrix-5000 di JLM-Lifetech e il sistema di PCR a fluorescenza quantitativa QX600 hanno unito le forze come un "duo d'oro"," assumendo rispettivamente le responsabilità chiave di "calibrazione" e "rilevazione".
In questo studio, i ricercatori hanno prima costruito plasmidi ricombinanti contenenti i geni bersaglio dei cinque virus.,Il team di ricerca ha scelto il sistema di PCR digitale Digital Matrix-5000 di JLM-Lifetech per una quantificazione precisa.
Come illustrato nelle figure seguenti, la quantificazione assoluta è stata effettuata sui plasmidi positivi di BTV, FMDV, SBV, PPRV e SPPV-GTPV.I grafici delle goccioline per ciascun plasmido bersaglio hanno dimostrato un'ottima separazione tra goccioline positive e negativeLa concentrazione di ciascun materiale di riferimento standard variava da 2,13 x 103a 1,02 x 104Copie/μL, fornendo una concentrazione solida di base per la successiva generazione di curve standard e analisi della sensibilità.
Con la "regola" precisa fornita dalla PCR digitale di JLM-Lifetech, il team di ricerca ha quindi utilizzato il sistema di PCR a fluorescenza quantitativa JLM-Lifetech QX600 per stabilire il test di rilevamento multiplex..Hanno ottenuto con successo la rilevazione sincronizzata di tutti e cinque i bersagli virali all'interno di un unico sistema di reazione:
Acquisizione simultanea multicanale:Durante la reazione, il QX600 ha raccolto con successo segnali di fluorescenza attraverso più canali, tra cui FAM, HEX, ROX, TAMRA, CY5 e CY5.5, garantendo che i segnali dei diversi virus non si interferissero a vicenda e potessero essere identificati con precisione.
Compatibilità di sistema eccezionale:Rispetto agli assaggi singleplex, l'efficienza di amplificazione (valore E) del sistema multiplex è rimasta nell'intervallo ideale del 90%-100% e i coefficienti di correlazione (R2) erano tutti maggiori di 0.996Ciò dimostra l'elevata stabilità dello strumento e il basso tasso di errore nel rilevamento multiplex.
La combinazione di "calibrazione digitale PCR + rilevamento QX600" di JLM-Lifetech ha fornito prestazioni eccezionali per questa svolta di ricerca:
Specificità al 100%:Il metodo stabilito ha generato segnali di amplificazione solo per i virus bersaglio, rimanendo negativi per altri sette patogeni comuni che colpiscono pecore e capre.
Ultra elevata sensibilità:Il limite di rilevamento (LoD) per ciascun bersaglio era inferiore a 5,31 copie/μL. Anche se la carica virale in un campione è estremamente bassa, questo metodo può catturarla in modo sensibile.
Punteggio perfetto nella convalida clinica:Nel test su 500 campioni clinici, il metodo ha rilevato con successo campioni positivi per PPRV, FMDV e BTV, ottenendo una coerenza del 100% con i risultati del metodo qPCR singleplex.
Questo risultato di ricerca non solo ha trovato il suo posto nella rivista principaleGiornale cinese di scienza veterinariaMa ha anche un profondo significato pratico: condensa in una sola prova quello che sarebbero stati cinque esperimenti separati, riducendo notevolmente il consumo di reagenti e materiali di consumo,e costi del lavoro. Questo è particolarmente adatto per le screening su larga scala in aree di coltivazione intensiva come il nord-ovest della Cina e fornisce un potente "occhio intelligente" per una rapida quarantena doganale nei porti.Come sostenitore tecnico di questa ricerca, è profondamente onorato.
