"Twin Stars" de JLM-Lifetech ayudan a CAHS a establecer un nuevo método de detección "multiplex 5 en 1" para ovejas y cabras
En el campo de batalla de la prevención y el control de las enfermedades animales, el tiempo es vida y la precisión es la victoria.el virus de las plagas de los pequeños rumiantes (PPRV), y el virus de la viruela de las ovejas y de las cabras (SPPV-GTPV) son cinco enfermedades virales importantes que amenazan gravemente a la industria de la cría de ovejas y cabras.lesiones de la mucosa, y erupciones cutáneas) y siendo propensos a infecciones mixtas, detectarlas mediante pruebas de un solo patógeno es a la vez lento y costoso.Dichos métodos tradicionales ya no pueden satisfacer las necesidades urgentes de cuarentena aduanera y control epidemiológico a gran escala.
Recientemente, el equipo de investigación dirigido por Shi Xiju de la Academia China de Ciencias de los Animales Domésticos (CAHS) / Academia China de Ciencias y Tecnología de Aduanas publicó un gran avance de investigación en el campo de laRevista china de ciencia veterinariaEn este estudio, los investigadores han desarrollado un método de RT-PCR de fluorescencia en tiempo real capaz de detectar simultáneamente estos cinco virus cruciales de pequeños rumiantes.El sistema de PCR digital Digital Matrix-5000 de JLM-Lifetech y el sistema de PCR de fluorescencia cuantitativa QX600 unieron sus fuerzas como un "duo de oro"," asumiendo las responsabilidades clave de "calibración" y "detección", respectivamente.
En este estudio, los investigadores primero construyeron plásmidos recombinantes que contienen los genes diana de los cinco virus.,El equipo de investigación eligió el sistema de PCR digital Digital Matrix-5000 de JLM-Lifetech para una cuantificación precisa.
Como se muestra en las figuras siguientes, se realizó una cuantificación absoluta en los plásmidos positivos de BTV, FMDV, SBV, PPRV y SPPV-GTPV.Las gráficas de gotas para cada plásmido objetivo demostraron una excelente separación entre gotas positivas y negativasLa concentración de cada material de referencia estándar osciló entre 2,13 x 103a 1,02 x 104copias/μL, proporcionando una concentración sólida de referencia para la generación de curvas estándar y el análisis de sensibilidad posteriores.
Con la "línea" precisa proporcionada por la PCR digital de JLM-Lifetech, el equipo de investigación utilizó el sistema de PCR de fluorescencia cuantitativa JLM-Lifetech QX600 para establecer el ensayo de detección múltiple..Lograron con éxito la detección sincronizada de los cinco objetivos virales dentro de un solo sistema de reacción:
Adquisición simultánea de múltiples canales:Durante la reacción, el QX600 recogió con éxito señales de fluorescencia a través de múltiples canales, incluidos FAM, HEX, ROX, TAMRA, CY5 y CY5.5, asegurando que las señales de los diferentes virus no se interfieran mutuamente y pudieran identificarse con precisión.
Compatibilidad excepcional del sistema:En comparación con los ensayos single-plex, la eficiencia de amplificación (valor E) del sistema multiplex se mantuvo dentro del rango ideal del 90%-100% y los coeficientes de correlación (R2) fueron todos mayores de 0.996Esto demuestra la alta estabilidad del instrumento y la baja tasa de error en la detección de múltiples.
La combinación de la "calibración digital de PCR + detección QX600" de JLM-Lifetech proporcionó un rendimiento excepcional para este avance en la investigación:
Especificidad del 100%:El método establecido generó señales de amplificación solo para los virus diana, permaneciendo negativas para otros siete patógenos comunes que afectan a ovejas y cabras.
Sensibilidad muy alta:El límite de detección (LoD) para cada objetivo fue inferior a 5,31 copias/μL. Incluso si la carga viral en una muestra es extremadamente baja, este método puede capturarla de manera sensible.
Puntuación perfecta en la validación clínica:En la prueba de 500 muestras clínicas, el método detectó con éxito muestras positivas para PPRV, FMDV y BTV, logrando una consistencia del 100% con los resultados del método qPCR singleplex.
Este logro de investigación no sólo encontró su lugar en la revista principalRevista china de ciencia veterinariaPero también tiene un profundo significado práctico, condensa lo que habrían sido cinco experimentos separados en una sola ejecución, reduciendo en gran medida el consumo de reactivos y consumibles,así como los costos laboralesEsto es particularmente adecuado para pruebas a gran escala en zonas de cultivo intensivo como el noroeste de China, y proporciona un poderoso "ojo inteligente" para una rápida cuarentena aduanera en los puertos.Como el apoyo técnico detrás de esta investigación, es un gran honor.
