تساعد تقنية PCR "Twin Stars" التابعة لشركة JLM-Lifetech CAHS في إنشاء طريقة جديدة للكشف عن "5 في 1" للأغنام والماعز
في ساحة المعركة للوقاية من الأمراض الحيوانية ومكافحتها، الوقت هو الحياة، والدقة هي النصر. يعد فيروس اللسان الأزرق (BTV)، وفيروس مرض الحمى القلاعية (FMDV)، وفيروس شمالنبرغ (SBV)، وفيروس آفات المجترات الصغيرة (PPRV)، وفيروس جدري الأغنام/الماعز (SPPV-GTPV) خمسة أمراض فيروسية رئيسية تهدد بشدة صناعة تربية الأغنام والماعز. إن مشاركة المظاهر السريرية المماثلة (مثل الحمى الشديدة، والآفات المخاطية، والطفح الجلدي) والتعرض للعدوى المختلطة، والكشف عنها من خلال اختبار العامل الممرض الواحد، يستغرق وقتًا طويلاً ومكلفًا. ولم تعد هذه الأساليب التقليدية قادرة على تلبية الاحتياجات الملحة للحجر الصحي الجمركي والفحص الوبائي على نطاق واسع.
في الآونة الأخيرة، نشر فريق البحث بقيادة شي شيجو في الأكاديمية الصينية لعلوم الحيوان المنزلية (CAHS) / الأكاديمية الصينية لعلوم وتكنولوجيا الجمارك إنجازًا بحثيًا كبيرًا في مجالالمجلة الصينية للعلوم البيطرية. لقد نجحوا في إنشاء طريقة RT-PCR متعددة الإرسال في الوقت الحقيقي قادرة على اكتشاف هذه الفيروسات المجترة الصغيرة الخمسة الحاسمة في وقت واحد. في هذه الدراسة، انضم نظام PCR الرقمي Digital Matrix-5000 التابع لشركة JLM-Lifetech ونظام PCR الكمي QX600 إلى "الثنائي الذهبي"، حيث تولى المسؤوليات الرئيسية المتمثلة في "المعايرة" و"الاكتشاف" على التوالي.
في هذه الدراسة، قام الباحثون أولاً ببناء البلازميدات المؤتلفة التي تحتوي على الجينات المستهدفة للفيروسات الخمسة. لتحديد أرقام النسخ الدقيقة الموجودة في هذه "المواد المرجعية القياسية"، اختار فريق البحث نظام PCR الرقمي من JLM-Lifetech's Digital Matrix-5000 لإجراء القياس الكمي الدقيق.
كما هو مبين في الأشكال أدناه، تم إجراء القياس الكمي المطلق على البلازميدات الإيجابية لـ BTV وFMDV وSBV وPPRV وSPPV-GTPV. أظهرت مخططات القطرات لكل بلازميد مستهدف فصلًا ممتازًا بين القطرات الإيجابية والسلبية. تراوح تركيز كل مادة مرجعية قياسية بين 2.13 × 103إلى 1.02 × 104نسخ/ميكروليتر، مما يوفر خط أساس قوي للتركيز لتوليد المنحنى القياسي اللاحق وتحليل الحساسية.
باستخدام "المسطرة" الدقيقة التي يوفرها جهاز PCR الرقمي الخاص بشركة JLM-Lifetech، استخدم فريق البحث بعد ذلك نظام PCR الفلوري الكمي JLM-Lifetech QX600 لإنشاء اختبار الكشف عن تعدد الإرسال. لقد نجحوا في تحقيق الكشف المتزامن لجميع الأهداف الفيروسية الخمسة ضمن نظام تفاعل واحد:
الاستحواذ المتزامن متعدد القنوات:أثناء التفاعل، نجح QX600 في جمع إشارات الفلورسنت عبر قنوات متعددة، بما في ذلك FAM وHEX وROX وTAMRA وCY5 وCY5.5، مما يضمن خلو إشارات الفيروسات المختلفة من التداخل المتبادل ويمكن تحديدها بدقة.
توافق النظام المتميز:بالمقارنة مع فحوصات الإرسال الفردي، ظلت كفاءة التضخيم (القيمة E) لنظام تعدد الإرسال ضمن النطاق المثالي الذي يتراوح بين 90% إلى 100%، ومعاملات الارتباط (R)2) كانت جميعها أكبر من 0.996. يوضح هذا الاستقرار العالي للأداة وانخفاض معدل الخطأ في الكشف عن تعدد الإرسال.
أدى الجمع بين "معايرة PCR الرقمية + اكتشاف QX600" من JLM-Lifetech إلى تقديم أداء استثنائي لهذا الإنجاز البحثي:
خصوصية 100%:أنتجت الطريقة المتبعة إشارات تضخيم للفيروسات المستهدفة فقط، وبقيت سلبية بالنسبة لسبعة مسببات أمراض شائعة أخرى تؤثر على الأغنام والماعز.
حساسية عالية للغاية:كان حد الكشف (LoD) لكل هدف أقل من 5.31 نسخة/ميكروليتر. حتى لو كان الحمل الفيروسي في العينة منخفضًا للغاية، فيمكن لهذه الطريقة التقاطه بحساسية.
النتيجة المثالية في التحقق السريري:في اختبار 500 عينة سريرية، نجحت الطريقة في الكشف عن عينات إيجابية لـ PPRV وFMDV وBTV، مما حقق اتساقًا بنسبة 100% مع نتائج طريقة Singleplex qPCR.
لم يجد هذا الإنجاز البحثي مكانه في المجلة الأساسية فحسبالمجلة الصينية للعلوم البيطريةولكنه يحمل أيضًا أهمية عملية عميقة. إنه يكثف ما كان يمكن أن يكون خمس تجارب منفصلة في تشغيل واحد، مما يقلل بشكل كبير من استهلاك الكواشف والمواد الاستهلاكية، وكذلك تكاليف العمالة. وهذا مناسب بشكل خاص لعمليات الفحص واسعة النطاق في المناطق الزراعية المكثفة مثل شمال غرب الصين، ويوفر "عينًا ذكية" قوية للحجر الصحي الجمركي السريع في الموانئ. إن شركة JLM-Lifetech، باعتبارها الداعم الفني وراء هذا البحث، تحظى بشرف كبير.
