JLM-Lifetech's PCR "Twin Stars" helpt CAHS bij het opzetten van een nieuwe "5-in-1 Multiplex" detectiemethode voor schapen en geiten
In het strijdveld van de preventie en bestrijding van dierziekten is tijd het leven en precisie de overwinning.Pests des petits ruminants virus (PPRV), en schapenpokken/geitenpokkenvirus (SPPV-GTPV) zijn vijf belangrijke virale ziekten die de schapen- en geitenhouderijindustrie ernstig bedreigen.slijmvliezen, en huiduitslag) en gevoelig zijn voor gemengde infecties, is het detecteren van deze infecties door middel van het testen van één pathogeen zowel tijdrovend als kostbaar.Dergelijke traditionele methoden kunnen niet langer tegemoetkomen aan de dringende behoeften van douanequarantine en grootschalige epidemiologische screening.
Onlangs publiceerde het onderzoeksteam onder leiding van Shi Xiju van de Chinese Academie voor Huishoudelijke Dierenwetenschappen (CAHS) / Chinese Academie voor Douanewetenschappen en Technologie een belangrijke doorbraak in het onderzoek naar deChinese Journal of Veterinary ScienceZe hebben met succes een multiplex real-time fluorescentie RT-PCR-methode ontwikkeld die in staat is om deze vijf cruciale kleine herkauwersvirussen tegelijkertijd te detecteren.Het digitale PCR-systeem Digital Matrix-5000 van JLM-Lifetech en het kwantitatieve fluorescentie-PCR-systeem QX600 bundelden hun krachten als een "gouden duo"," waarbij zij de belangrijkste taken van respectievelijk "kalibratie" en "detectie" op zich nemen.
In dit onderzoek hebben onderzoekers eerst recombinant plasmiden geconstrueerd die de doelgenen van de vijf virussen bevatten.,Het onderzoeksteam koos voor het digitale PCR-systeem van JLM-Lifetech's Digital Matrix-5000 voor nauwkeurige kwantificatie.
Zoals in de onderstaande figuur is aangetoond, werd absolute kwantificatie uitgevoerd op de positieve plasmiden van BTV, FMDV, SBV, PPRV en SPPV-GTPV.De druppelgrafieken voor elk doelplasmide toonden een uitstekende scheiding aan tussen positieve en negatieve druppels.De concentratie van elk standaard referentiemateriaal varieerde van 2,13 x 103tot 1,02 x 104kopieën/μL, waardoor een vaste concentratiebasis wordt bereikt voor latere standaardcurve-generatie en gevoeligheidsanalyse.
Met de precieze "regelaar" die werd geleverd door de digitale PCR van JLM-Lifetech, gebruikte het onderzoeksteam vervolgens het kwantitatieve fluorescentie-PCR-systeem van JLM-Lifetech QX600 om de multiplex-detectie-test vast te stellen..Ze hebben met succes de gesynchroniseerde detectie van alle vijf virale doelwitten binnen een enkel reactiesysteem bereikt:
Multi-channel gelijktijdige overname:Tijdens de reactie verzamelde de QX600 met succes fluorescentie signalen via meerdere kanalen, waaronder FAM, HEX, ROX, TAMRA, CY5 en CY5.5, zodat de signalen van de verschillende virussen geen onderlinge interferentie hebben en nauwkeurig kunnen worden geïdentificeerd.
Uitstekende systeemcompatibiliteit:In vergelijking met single-plex assays bleef de versterkingsefficiëntie (E-waarde) van het multiplex-systeem binnen het ideale bereik van 90%~100%, en de correlatiecoëfficiënten (R2) waren allemaal groter dan 0.996Dit toont de hoge stabiliteit van het instrument en het lage foutenpercentage bij multiplexdetectie.
De combinatie van de "digitale PCR-kalibratie + QX600-detectie" van JLM-Lifetech leverde uitzonderlijke prestaties voor deze doorbraak in het onderzoek:
100% specificiteit:De gevestigde methode genereerde alleen amplificatiesignalen voor de doelvirussen en bleef negatief voor zeven andere veel voorkomende ziekteverwekkers die schapen en geiten aantasten.
Ultra hoge gevoeligheid:De detectiegrens (LoD) voor elk doel was lager dan 5,31 kopieën/μL. Zelfs als de virale lading in een monster extreem laag is, kan deze methode deze gevoelig vangen.
Perfecte score in klinische validatie:Bij het testen van 500 klinische monsters heeft de methode met succes positieve monsters voor PPRV, FMDV en BTV gedetecteerd, waarbij 100% consistentie werd bereikt met de resultaten van de singleplex qPCR-methode.
Deze onderzoeksprestatie heeft niet alleen een plaats gevonden in het kerntijdschriftChinese Journal of Veterinary ScienceHet condenseert wat vijf afzonderlijke experimenten zouden zijn geweest in één run, waardoor het verbruik van reagentia en verbruiksmaterialen sterk wordt verminderd.evenals arbeidskostenDit is vooral geschikt voor grootschalige screening in intensieve landbouwgebieden zoals Noordwest-China en biedt een krachtig "slim oog" voor snelle douanequarantine in havens.als de technische ondersteuner achter dit onderzoek, is zeer vereerd.
