La PCR "Twin Stars" de JLM-Lifetech aide le CAHS à établir une nouvelle méthode de détection "multiplex 5 en 1" pour les moutons et les chèvres.

Sur le champ de bataille de la prévention et du contrôle des maladies animales, le temps est la vie et la précision est la victoire. Le virus de la fièvre catarrhale (BTV), le virus de la fièvre aphteuse (FMDV), le virus de Schmallenberg (SBV), le virus de la peste des petits ruminants (PPRV) et le virus de la variole ovine/caprine (SPPV-GTPV) sont cinq maladies virales majeures qui menacent gravement l'industrie de l'élevage ovin et caprin. Partageant des manifestations cliniques similaires (telles qu’une forte fièvre, des lésions des muqueuses et des éruptions cutanées) et étant sujettes à des infections mixtes, leur détection par des tests d’agents pathogènes uniques prend du temps et coûte cher. Ces méthodes traditionnelles ne peuvent plus répondre aux besoins urgents de quarantaine douanière et de dépistage épidémiologique à grande échelle.

Récemment, l'équipe de recherche dirigée par Shi Xiju de l'Académie chinoise des sciences des animaux domestiques (CAHS) / Académie chinoise des sciences et technologies douanières a publié une avancée majeure dans la recherche sur leJournal chinois des sciences vétérinaires. Ils ont réussi à établir une méthode RT-PCR à fluorescence multiplex en temps réel capable de détecter simultanément ces cinq virus cruciaux des petits ruminants. Dans cette étude, le système PCR numérique Digital Matrix-5000 de JLM-Lifetech et le système PCR quantitatif à fluorescence QX600 ont uni leurs forces pour former un « duo en or », assumant respectivement les responsabilités clés de « calibrage » et de « détection ».

Dans cette étude, les chercheurs ont d’abord construit des plasmides recombinants contenant les gènes cibles des cinq virus. Pour déterminer les nombres exacts de copies contenus dans ces « matériaux de référence standard », l'équipe de recherche a choisi le système PCR numérique Digital Matrix-5000 de JLM-Lifetech pour une quantification précise.

Comme le montrent les figures ci-dessous, une quantification absolue a été réalisée sur les plasmides positifs de BTV, FMDV, SBV, PPRV et SPPV-GTPV. Les tracés de gouttelettes pour chaque plasmide cible ont démontré une excellente séparation entre les gouttelettes positives et négatives. La concentration de chaque matériau de référence standard variait de 2,13 x 10³à 1,02 x 10⁴copies/μL, fournissant une base de concentration solide pour la génération ultérieure de courbes d’étalonnage et l’analyse de sensibilité.

Avec la « règle » précise fournie par la PCR numérique de JLM-Lifetech, l'équipe de recherche a ensuite utilisé le système PCR quantitatif à fluorescence JLM-Lifetech QX600 pour établir l'analyse de détection multiplex. Ils ont réussi à détecter de manière synchronisée les cinq cibles virales au sein d’un seul système de réaction :

Acquisition simultanée multicanal :Au cours de la réaction, le QX600 a collecté avec succès des signaux de fluorescence sur plusieurs canaux, notamment FAM, HEX, ROX, TAMRA, CY5 et ​​CY5.5, garantissant ainsi que les signaux des différents virus étaient exempts d'interférences mutuelles et pouvaient être identifiés avec précision.

Compatibilité système exceptionnelle :Par rapport aux tests singleplex, l'efficacité d'amplification (valeur E) du système multiplex est restée dans la plage idéale de 90 % à 100 %, et les coefficients de corrélation (R²) étaient tous supérieurs à 0,996. Cela démontre la grande stabilité de l'instrument et son faible taux d'erreur en matière de détection multiplex.

La combinaison de « l'étalonnage PCR numérique + détection QX600 » de JLM-Lifetech a fourni des performances exceptionnelles pour cette avancée de recherche :

100 % de spécificité :La méthode établie a généré des signaux d'amplification uniquement pour les virus cibles, restant négatifs pour sept autres agents pathogènes courants affectant les moutons et les chèvres.

Ultra-haute sensibilité :La limite de détection (LoD) pour chaque cible était inférieure à 5,31 copies/μL. Même si la charge virale dans un échantillon est extrêmement faible, cette méthode peut la capturer avec sensibilité.

Score parfait en validation clinique :Lors des tests de 500 échantillons cliniques, la méthode a réussi à détecter des échantillons positifs pour le PPRV, le FMDV et le BTV, obtenant ainsi une cohérence à 100 % avec les résultats de la méthode qPCR simpleplex.

Cette réalisation de recherche n'a pas seulement trouvé sa place dans la revue principaleJournal chinois des sciences vétérinairesmais il revêt également une profonde signification pratique. Il condense ce qui aurait été cinq expériences distinctes en une seule série, réduisant considérablement la consommation de réactifs et de consommables, ainsi que les coûts de main-d'œuvre. Ceci est particulièrement adapté aux contrôles à grande échelle dans les zones d'agriculture intensive comme le nord-ouest de la Chine, et fournit un « œil intelligent » puissant pour une quarantaine douanière rapide dans les ports. JLM-Lifetech, en tant que support technique derrière cette recherche, est profondément honoré.