PCR "Twin Stars" da JLM-Lifetech auxilia CAHS no estabelecimento de um novo método de detecção "5 em 1 Multiplex" para ovinos e caprinos
No campo de batalha da prevenção e controle de doenças animais, tempo é vida e precisão é vitória. O vírus da língua azul (BTV), o vírus da febre aftosa (FMDV), o vírus Schmallenberg (SBV), o vírus das pragas dos pequenos ruminantes (PPRV) e o vírus da varíola ovina/caprina (SPPV-GTPV) são cinco doenças virais principais que ameaçam gravemente a indústria da criação de ovinos e caprinos. Compartilhando manifestações clínicas semelhantes (como febre alta, lesões nas mucosas e erupções cutâneas) e sendo propenso a infecções mistas, detectá-las por meio de testes de patógeno único é demorado e caro. Esses métodos tradicionais já não conseguem satisfazer as necessidades urgentes de quarentena aduaneira e de rastreio epidemiológico em grande escala.
Recentemente, a equipe de pesquisa liderada por Shi Xiju da Academia Chinesa de Ciência Animal Doméstica (CAHS)/Academia Chinesa de Ciência e Tecnologia Aduaneira publicou um importante avanço de pesquisa noJornal Chinês de Ciência Veterinária. Eles estabeleceram com sucesso um método multiplex de RT-PCR de fluorescência em tempo real, capaz de detectar simultaneamente esses cinco vírus cruciais para pequenos ruminantes. Neste estudo, o sistema de PCR digital Digital Matrix-5000 da JLM-Lifetech e o sistema de PCR de fluorescência quantitativa QX600 uniram forças como uma "dupla de ouro", assumindo as principais responsabilidades de "calibração" e "detecção", respectivamente.
Neste estudo, os pesquisadores construíram primeiro plasmídeos recombinantes contendo os genes alvo dos cinco vírus. Para determinar os números exatos de cópias contidos nesses “materiais de referência padrão”, a equipe de pesquisa escolheu o sistema de PCR digital Digital Matrix-5000 da JLM-Lifetech para quantificação precisa.
Conforme mostrado nas figuras abaixo, a quantificação absoluta foi realizada nos plasmídeos positivos de BTV, FMDV, SBV, PPRV e SPPV-GTPV. Os gráficos de gotículas para cada plasmídeo alvo demonstraram excelente separação entre gotículas positivas e negativas. A concentração de cada material de referência padrão variou de 2,13 x 103para 1,02 x 104cópias/μL, fornecendo uma linha de base de concentração sólida para posterior geração de curva padrão e análise de sensibilidade.
Com a "régua" precisa fornecida pelo PCR digital da JLM-Lifetech, a equipe de pesquisa utilizou então o sistema de PCR de fluorescência quantitativa JLM-Lifetech QX600 para estabelecer o ensaio de detecção multiplex. Eles alcançaram com sucesso a detecção sincronizada de todos os cinco alvos virais dentro de um único sistema de reação:
Aquisição simultânea multicanal:Durante a reação, o QX600 coletou com sucesso sinais de fluorescência em vários canais, incluindo FAM, HEX, ROX, TAMRA, CY5 e CY5.5, garantindo que os sinais de diferentes vírus estivessem livres de interferência mútua e pudessem ser identificados com precisão.
Excelente compatibilidade de sistema:Em comparação com ensaios singleplex, a eficiência de amplificação (valor E) do sistema multiplex permaneceu dentro da faixa ideal de 90% a 100%, e os coeficientes de correlação (R2) foram todos maiores que 0,996. Isto demonstra a alta estabilidade do instrumento e a baixa taxa de erro na detecção multiplex.
A combinação da "calibração PCR digital + detecção QX600" da JLM-Lifetech proporcionou um desempenho excepcional para este avanço de pesquisa:
100% Especificidade:O método estabelecido gerou sinais de amplificação apenas para os vírus alvo, permanecendo negativos para sete outros patógenos comuns que afetam ovinos e caprinos.
Sensibilidade ultra-alta:O limite de detecção (LoD) para cada alvo foi inferior a 5,31 cópias/μL. Mesmo que a carga viral numa amostra seja extremamente baixa, este método pode capturá-la com sensibilidade.
Pontuação Perfeita em Validação Clínica:Ao testar 500 amostras clínicas, o método detectou com sucesso amostras positivas para PPRV, FMDV e BTV, alcançando 100% de consistência com os resultados do método qPCR singleplex.
Esta conquista de pesquisa não apenas encontrou seu lugar na revista principalJornal Chinês de Ciência Veterináriamas também carrega um profundo significado prático. Ele condensa o que seriam cinco experimentos separados em uma única execução, reduzindo bastante o consumo de reagentes e consumíveis, bem como os custos de mão de obra. Isto é particularmente adequado para triagens em grande escala em áreas de agricultura intensiva, como o noroeste da China, e fornece um poderoso “olho inteligente” para uma rápida quarentena alfandegária nos portos. A JLM-Lifetech, como apoiadora técnica por trás desta pesquisa, está profundamente honrada.
